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全身體積描記系統(tǒng)在睡眠呼吸暫停(OSA)方面的應(yīng)用

更新時(shí)間:2023-05-06      點(diǎn)擊次數(shù):1498
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上篇公眾號(hào)文章介紹了昆士蘭大學(xué)腦研究所Elizabeth Coulson 教授關(guān)于睡眠時(shí)大腦缺氧和阿爾茨海默病之間的因果關(guān)系的研究。該研究團(tuán)隊(duì)采用注射UII- SAP誘導(dǎo)膽堿能( cMPT)病變,開發(fā)了一種小鼠SDB模型。研究中利用了全身體積描記技術(shù)(whole-body plethysmograph,WBP)對(duì)模型動(dòng)物的睡眠呼吸的情況進(jìn)行了詳細(xì)的分析。




實(shí)驗(yàn)方法

將C57BL/6小鼠麻醉后,注射UII- SAP誘導(dǎo)膽堿能( cMPT)病變。為了測(cè)量睡眠狀態(tài),采用無(wú)線遙測(cè)技術(shù)測(cè)量腦電圖(EEG)、肌電圖(EMG)和活動(dòng)節(jié)律。


實(shí)驗(yàn)時(shí),小鼠被放置在一個(gè)全身體積描記器中。使用全身體積描記系統(tǒng)對(duì)小鼠進(jìn)行連續(xù)4小時(shí)的評(píng)估,期間記錄呼吸,同時(shí)記錄其他不受限制、自由運(yùn)動(dòng)的小鼠的腦電圖。這種方法提供了一種間接的潮氣量測(cè)量,它與密封腔室呼吸過(guò)程中產(chǎn)生的循環(huán)腔室壓力信號(hào)成正比。

首先讓小鼠30 min適應(yīng)環(huán)境,然后持續(xù)記錄3小時(shí)數(shù)據(jù)。每2秒記錄一次的呼吸測(cè)量數(shù)據(jù)與腦電圖預(yù)測(cè)的睡眠狀態(tài)關(guān)聯(lián)。只有確定的睡眠/覺(jué)醒狀態(tài)的數(shù)據(jù)點(diǎn)被納入分析,沒(méi)有應(yīng)用其他數(shù)據(jù)排除標(biāo)準(zhǔn)。然而,腦電圖標(biāo)準(zhǔn)偏差>3的小鼠被排除在分析之外。一只損傷的小鼠在睡眠中呼吸頻率降低了10倍(與所有其他小鼠相比)被排除在分析之外。

對(duì)每只小鼠,對(duì)睡眠期間的每個(gè)呼吸測(cè)量值(REM+NREM)和清醒期的值取平均值。數(shù)據(jù)通過(guò)兩種方式(性別、損傷)的方差分析對(duì)每只小鼠的睡眠和覺(jué)醒狀態(tài)進(jìn)行分析。每只小鼠的每個(gè)參數(shù)的可變性也使用Levene的方差相等檢驗(yàn)的方法計(jì)算,對(duì)于每只小鼠,從所有的值中減去每個(gè)參數(shù)的平均值,并通過(guò)單因素方差分析對(duì) cMPT損傷組或?qū)φ战M之間的結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。




實(shí)驗(yàn)結(jié)果

cMPT損傷導(dǎo)致睡眠呼吸中斷

在光照期間使用無(wú)約束的全身體積描記技術(shù),通過(guò)腦電圖(EEG)測(cè)定 cMPT損傷和非損傷小鼠在睡眠和清醒期間的呼吸模式的影響。假設(shè),損傷小鼠在睡眠時(shí)由于上呼吸道阻力而減少氣流,吸氣峰值流速(PIF)將會(huì)減少,吸氣時(shí)間(EIP)將會(huì)增加,呼吸間隔時(shí)間將會(huì)增加,就像阻塞性睡眠呼吸暫停(OSA)患者發(fā)生的情況一樣。由于性別、睡眠-覺(jué)醒和損傷的可能影響,以及構(gòu)成呼吸周期的體積描記術(shù)變量的數(shù)量,我們總結(jié)了合并數(shù)據(jù)(圖2A-D),其中使用雄性(圖2E)和雌性(圖2B)小鼠的平均測(cè)量值來(lái)繪制典型的呼吸。重要的是,在清醒狀態(tài)下,我們發(fā)現(xiàn)對(duì)照組和 cMPT損傷小鼠之間的任何呼吸參數(shù)的平均值都沒(méi)有顯著差異(圖2A、C、E)。相比之下,損傷鼠在睡眠期間對(duì)上述呼吸測(cè)量參數(shù)有顯著影響。

與預(yù)期的一樣,與對(duì)照組動(dòng)物相比,睡眠期間的平均呼吸頻率(f)下降(圖2C-E)。然而,呼吸頻率在雄性和雌性之間也有顯著性差異。令人驚訝的是,受損小鼠在睡眠期間的呼吸頻率平均低于對(duì)照組,并且與清醒時(shí)的呼吸頻率沒(méi)有顯著差異(圖2A-E)。然而,兩個(gè)性別的損傷小鼠中,睡眠期間的呼吸時(shí)間,無(wú)論平均頻率如何,顯著大于睡眠對(duì)照小鼠(圖2C)。

對(duì)人類來(lái)說(shuō),呼吸暫停(Apnea)是指氣流停止10秒,這是一個(gè)人通常進(jìn)行三次呼吸的時(shí)間(睡覺(jué)時(shí)的頻率為12-20次/分鐘)。在睡眠期間,對(duì)照組小鼠平均每2秒呼吸5次(150次/分鐘)。然而, cMPT損傷小鼠明顯更有可能出現(xiàn)呼吸頻率降低的相鄰周期(<100次呼吸/分鐘),在 cMPT損傷小鼠和對(duì)照組小鼠中,分別有54%和17%的低頻率呼吸周期持續(xù)時(shí)間超過(guò)4s。有趣的是,在損傷小鼠中,有一種在長(zhǎng)低頻呼吸期之后是清醒期的趨勢(shì),而在對(duì)照組小鼠中,低頻呼吸期和睡眠/覺(jué)醒轉(zhuǎn)變之間沒(méi)有明顯的關(guān)聯(lián)。

在對(duì)照組和 cMPT損傷的小鼠中,平均PIF在睡眠期間均降低(圖2D)。然而,在損傷小鼠中,睡眠期間的平均EIP比對(duì)照組小鼠短,相當(dāng)于它們?cè)谇逍央A段的平均EIP。然而,在睡眠期間, cMPT損傷小鼠的PIF和EIP比對(duì)照組小鼠的變化更大。這表明,雖然平均吸氣流量較慢,花費(fèi)的時(shí)間較長(zhǎng),但 cMPT損傷小鼠在睡眠期間同時(shí)有非常大和非常小的峰值流量測(cè)量和吸氣時(shí)間。

至于睡眠時(shí)的對(duì)照組小鼠,兩個(gè)性別的損傷小鼠的PEF都降低了,這表明呼氣期較慢。然而,雄性(圖2E)和雌性(補(bǔ)充圖2)小鼠呼氣時(shí)的呼吸模式與睡眠無(wú)關(guān),特別是在對(duì)呼氣總時(shí)間的平均測(cè)量方面(EEP;睡眠-覺(jué)醒配對(duì),雙向方差分析)和呼氣時(shí)峰值流量占總呼氣時(shí)間的一部分(Rpef);對(duì)照組雄性小鼠在睡眠期間的平均測(cè)量值明顯大于雌性,由于損傷組中雄性而非雌性的值顯著降低,在EEP中觀察到與性和睡眠狀態(tài)的顯著交互作用(睡眠-覺(jué)醒配對(duì),雙向方差分析)。

盡管如此,睡眠損傷小鼠的平均EEP明顯低于睡眠對(duì)照組小鼠,并且與清醒小鼠相當(dāng)。然而,在雄性損傷小鼠中,睡眠時(shí)EEP的變化明顯高于對(duì)照組(圖2C)。盡管如此,睡眠時(shí)雄性和雌性損傷小鼠達(dá)到65%的呼氣時(shí)間的變化小于對(duì)照組小鼠(圖2C)。EEP包括任何呼吸之間的暫停,這些結(jié)果占損傷老鼠平均更頻繁的呼吸,也表明損傷老鼠,尤其是雄性,表現(xiàn)出一個(gè)高度可變的時(shí)間長(zhǎng)度之間的65%的呼氣和下一個(gè)吸入的開始。

我們還注意到,除Rt外,病變組小鼠在睡眠期間的呼吸測(cè)量均有顯著差異。此外,不同的小鼠在呼吸測(cè)量中變化不同,平均對(duì)照組和損傷動(dòng)物在潮氣量或及其衍生物方面沒(méi)有顯著差異,并不是所有小鼠都顯示出延長(zhǎng)的低頻呼吸周期。這表明,不同的動(dòng)物可能通過(guò)不同的生理機(jī)制補(bǔ)償了 cMPT損傷誘導(dǎo)的上呼吸道氣流的減少。

總之,這些數(shù)據(jù)表明, cMPT損傷的小鼠在睡眠期間具有高度可變的呼吸模式,平均而言,這與由于上呼吸道阻力而發(fā)生的吸入和呼氣措施的預(yù)測(cè)改變相一致,呼吸對(duì)呼吸的變化表明了由缺氧引發(fā)的恢復(fù)反應(yīng)。大多數(shù)受損小鼠在睡眠中也表現(xiàn)出幾秒鐘的呼吸頻率下降,隨后是覺(jué)醒,這可以被解釋為呼吸暫停事件。此外,與最常見(jiàn)的SDB形式一致,在休息時(shí),當(dāng) cMPT損傷小鼠在睡眠期間血氧測(cè)量30 min,發(fā)現(xiàn)血氧飽和度在80-90%左右,顯著低于空白小鼠的>95%(圖2F,G)。該結(jié)果表明, cMPT損傷影響呼吸模式,導(dǎo)致睡眠期間的輕度缺氧,這與氣道阻塞相一致。

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在清醒(A、B)或睡眠(C、D)期間注射對(duì)照空白SAP(A、C)或UII-SAP(B、D),采用全身體積描記記錄和對(duì)應(yīng)的EEG記錄下進(jìn)行靜態(tài)呼吸測(cè)量。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)是指對(duì)雄性和雌性小鼠的睡眠-覺(jué)醒配對(duì)雙向方差分析和Levene方差檢驗(yàn)。

E UII-SAP組或?qū)φ战M空白-SAP組雄性小鼠的平均多導(dǎo)睡眠測(cè)量(睡眠-覺(jué)醒配對(duì)雙向方差分析)f頻率,PIF峰值吸氣流量,PEF峰值呼氣流量,EIP吸氣時(shí)間,EEP呼氣時(shí)間,RT。


參考資料


Qian, L., Rawashdeh, O., Kasas, L. et al. Cholinergic basal forebrain degeneration due to sleep-disordered breathing exacerbates pathology in a mouse model of Alzheimer’s disease. Nat Commun 13, 6543 (2022).



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